В задании необходимо определить музыкальный инструмент, который не использовался в России в XVI веке.
Из предложенных вариантов:
- Гусли - русский народный инструмент, известный с древних времен.
- Курай - башкирский и татарский народный инструмент, распространен в Волго-Уральском регионе.
- Кантеле - карельский и финский народный инструмент.
- Варган - инструмент, известный у многих народов, в том числе и в России.
- Гитара - струнный музыкальный инструмент, появившийся в Европе значительно позже XVI века.
Таким образом, гитара является инструментом, который не использовался в России в XVI веке.
Ответ: гитара.